Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病病征进展缓慢的过程中逐渐扩展

从第一次注意到呼吸道自身抗纤到注意到1型式哮喘针灸腹泻的重大突破领军在成年人初期就有很好的详细描述，多个呼吸道自身抗纤HIV的成年人中的有70%在血清转换后10周内患上哮喘，而随访15年的成年人这一人口比例减小到84%。来得之下，占针灸1型式哮喘一半以上的型式1型式哮喘的发病系统还不能取得充份的研究课题。

愈加多的人开始常用分期系统来定义1型式哮喘的重大突破：个纤在注意到多种呼吸道自身抗纤时踏入第1收尾，注意到摄入量持续性时踏入第2收尾，注意到腹泻时踏入第3收尾。一些多发呼吸道自身抗纤HIV的个纤，在1期和2期，重大突破较更慢，并工业发展为发病的1型式哮喘。我们在此之前详细描述了一四组在首次检验到多种呼吸道自身抗纤结果显示后数10年无哮喘的近于更慢重大突破者，这四组病患者数目寡，但特质非常明确。随后，我们发掘单单呼吸道自身抗原免疫CD8+T线粒纤反应当会在重大突破加速的病患者中的大体上不一直存在，但在早先发病和一直一直存在的哮喘病患者中的很容易检验到。这可能表明，与重大突破病患者来得，这些病患者免疫细胞当会的通气提高。

早期研究课题表明，尽管通气性T线粒纤(Treg)量正常，但哮喘病患者一直存在一些大体上功能缺陷，其中的都有对IL-2的反应当会控制能力降低。此外，哮喘病患者中的的畸变当CD4+T线粒纤可能对通气突显抵抗性，平庸为畸变当T线粒纤的诱发消退，自然地转化成的Treg和纤外转化成的抑制Treg，以及抗原经历的CD4+T线粒纤中的IL-2反应当会消退。本研究课题的目的是详细描述了CD4+通气性T线粒纤(Treg)在一小群近于加速重大突破者中的的特质，他们的平均岁数为43岁(31-72岁)，随访星期为18-32年。

方法：BOX研究课题是一项以人群进一步将的纵向研究课题，在21岁以下住院的病患者亲属中的检查1型式哮喘的凶险考量。我们在此之前详细描述了一直加速重大突破者的特质，他们保持良好多重呼吸道自身抗纤HIV将近10年，但不能注意到哮喘的针灸腹泻，更慢性或非进行时性免疫。随后，10名之前保持良好无哮喘并希望提供大量尿液结果显示的加速重大突破者纳入T和B线粒纤大体上功能系统性。在目前的研究课题中的，8名更慢重大突破者(SP四组)，中的位岁数43岁(31-72岁)，18 - 32岁之间的呼吸道自身抗纤HIV。所有的与会者都处于1型式哮喘重大突破的1期，尽管一些人随后失去了呼吸道自身抗纤对某些抗原的HIV反应当会，然而，一名病患者已经处于2期数6年，但不能注意到针灸腹泻，一名病患者被诊断为哮喘，该成年人72岁，在采集实验结果显示时，其HbA1c下降时到53 mmol/mol(7%)，在数据系统性中的对该ADP进行时了单独评估。分开外周血单个核线粒纤(PBMCs)，采用多实例流式线粒纤术和T线粒纤诱发试验评估ADP中的Treg的增益、平庸型式和大体上功能。常用FlowSOM和CITRUS(聚类鉴定、表征和紧接著)进行时无监督聚类系统性，评估Treg平庸型式。

结果：与有益ADP来得，来自更慢重大突破纤的心灵CD4+T线粒纤的监督聚类标示单单，转录的心灵CD4+ Treg增益减小，与止痛药抑制的TNFR相关蛋白(GITR)表达单单来减小有关。一名HbA1c下降时的病患者与重大突破加速者和比如说的对照四组来得，Treg磬有所不同。大体上功能系统性表明，与有益ADP来得，来自加速重大突破纤的Treg介导的CD4+畸变当T线粒纤诱发相比之下来说受损。平庸为对畸变当CD4+T线粒纤CD25和CD134表达单单来的诱发减小。

三幅1 深入的平庸型式系统性标示单单，CD4+Treg流感病毒在更慢重大突破链表中的减小。由FlowSOM聚合的Treg寝室，聚集在来自所有ADP的活CD4+CD45RA -线粒纤上。根据上面物表达单单来鉴定单单10个元簇:心灵T线粒纤_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;心灵T cell_4;CD49b心灵T线粒纤;HLA-DR + GITR +心灵T线粒纤;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)常用9个不同Treg上面聚合的10个元簇的MST。每个节点均是由一个战斗群(100个战斗群)，更大的元战斗群(10个元战斗群)在节点四组区域内上色。每个节点中的的饼三幅坚称单个上面的表达单单来档次。(b)每个元聚类的热三幅，以标示单单整纤上面表达单单来。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)聚合三幅，以及FlowSOM识别的每个元簇的覆盖层。(e-l)相比之下量级为每个metacluster筒支线三幅(量级> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +心灵T线粒纤(h)、心灵T cell_1(i),心灵T cell_2 (j),心灵T cell_3 (k) n d CD49b心灵T线粒纤(l)。粉红色白点均是由**SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验。此键适用于三幅形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

三幅2 常用CITRUS的预测模型式得单单论点，Treg增益的减小是重大突破加速的标志。国际标准介导(a - f)和柑橘系统性(g-k)比较SP与会者和比如说的HD与会者在CD4+CD45RA−T线粒纤上的区别。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群纤的均是由性三幅。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR表达单单来进行时分开，模拟FlowSOM群纤。(b) HD(黑点)和SP(蓝点)四组以及ADPSP 606(粉红色)中的CD25+ cd127的增益汇总三幅。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+介导子集的筒支线三幅;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑桔簇棒状由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3表达单单来风速着色，斜线突单单的簇被识别为SP和HD链表之间的不同。(j)筒支线三幅标示单单了在SP(蓝点)和HD(灰点)四组中的，CITRUS心灵Treg_3和Treg_4的相比之下量级(人口比例)。(k)直方三幅标示单单每个簇的平庸型式(粉红色)和Treg上面相比之下表达单单来与背景表达单单来(蓝色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇中的上面的表达单单来有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon配对大写字母秩检验

三幅3 与有益献血者来得，重大突破加速者心灵treg的GITR减小。每个心灵CD4+T线粒纤元簇(心灵T线粒纤_1;心灵T cell_2;心灵T cell_3;CD49b +心灵T线粒纤;HLA-DR + GITR +心灵T线粒纤;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检验每个表达单单来上面的变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)链表的表达单单来热三幅(sp606不都有在内)。(c,d)心灵Treg_4元簇中的所有HD(粉红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)的FlowSOM GITR表达单单来串联，标示单单直方三幅(c)和汇总三幅(d)。Wilcoxon配对大写字母秩和检验，p< 0.07(粉红色)所有ADP都有，p< 0.05(蓝色)ADPSP 606和比如说的HD不都有在测试中的。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs中的GITR表达单单来，从国际标准介导，从所有HD(粉红色)、所有SP(蓝色)和SP 606(粉红色)串联，标示单单直方三幅(e)和汇总三幅(f) *p< 0.05, Wilcoxon配对大写字母秩检验

三幅4 来自加速重大突破的CD4+ treg线粒纤控制畸变当CD4+T线粒纤的控制能力降低。SP四组用蓝色的支线和白点坚称，HD四组用粉红色的支线和白点坚称，粉红色的支线/白点坚称ADPsp606。常用CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T线粒纤进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被上面为CFSE, Treg按仔细观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活化线粒纤，培训3天后进行时流式线粒纤术检验。(a-d)与CD4+接收者者相比之下应当的treg培训(自纤)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD接收者者培训。(a,b,f) CFSE游离(a,e)和CFSE诱发百分比(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的诱发百分比。常用HIV对照(转录的响应当线粒纤不含treg)计数诱发百分比。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

三幅5 畸变当CD4+T线粒纤对加速重大突破的T线粒纤活化的诱发更敏感。SP四组用蓝色的支线和白点坚称，HD四组用粉红色的支线和白点坚称，粉红色的支线/白点坚称ADPsp606。常用CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T线粒纤进行时分选。CD4+CD25−(接收者者)被cfsel上面，treg按仔细观察的人口比例滴定。用抗CD3 /28微珠活化线粒纤，培训3天后进行时流式线粒纤术(CD25反染)和线粒纤因子系统性。HD Treg与HD、SP或sp606接收者者携手培训。(a,b) CFSE游离(a)和CFSE诱发调升(b)。(c,d) CD25诱发调升(c)和CD134诱发调升(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训中的的表达单单来。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差系统性。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

论点：我们得单单的论点是，来自加速重大突破子的活化心灵CD4+Treg在GITR表达单单来中的取得了扩展和珍贵，强调了进一步研究课题Treg在1型式哮喘风险个纤中的的异质性的必要性。

标题注解：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28